1940年9月27日，德、意、日三国在柏林签订了酝酿已久的军事同盟条约。条约共六条，其中主要内容为：“日本承认并尊重德意志和意大利在欧洲建立新秩序的领导权。德意志和意大利承认并尊重日本在大东亚建立新秩序的领导权。德意志、意大利和日本同意循着上述路线努力合作。三国并承允如果三缔约国中之一受到目前不在欧洲战争或中、日冲突中的一国攻击时，应以一切政治、经济和军事手段相助。”至此，德、意、日三国军事轴心正式结成。条约的矛头不仅指向那些正在与德、意、日交战和已被德、意、日奴役的国家，而且也指向尚未与德、意、日直接作战而反对德、意、日侵略的苏联和美国。对德、意、日说来，签订这项条约时是各怀鬼胎的。德国期望通过条约促使日本与英、美的矛盾进一步尖锐起来，在东方和太平洋上牵制英、美的力量，以便它对英、对苏作战。意大利则企图依仗德、日的实力，称霸地中海、北非和东非。日本想得到德、意的支持，以巩固已经攫得的权益和进一步侵占苏联的东部以及夺取太平洋的霸权。因此，这一侵略性条约的签订，使德、日与苏联的矛盾和英、美与德、意、日的矛盾更加尖锐，比较明显地形成了德、意、日与英、美、苏对立的态势。从1936年的“反共产国际”协定。到1940年的军事同盟条约，德、意、日从政治上到军事上形成了法西斯侵略轴心。
